Im Grunde genommen kannst jedes x-beliebiges Grafikbearbeitungsprogramm für diese Zwecke nehmen.
Profis setzen aber im Regelfall auf Photoshop. Dort kannst du mit dem nützlichen "Slice"-Tool dein Layout in einzelne Bilder teilen, um diese dann später in deine HTML/CSS-Datei zu integrieren.
http://www.youtube.com/watch?v=6ZcKifRpneg